dna的粗提取与鉴定流程

以下是高中生物实验中DNA粗提取与鉴定的标准步骤及注意事项:

一、实验材料与试剂

  1. 材料 :鸡血、哺乳动物红细胞等含DNA量高的生物组织

  2. 试剂

    • 0.1g/mL柠檬酸钠(溶解细胞)

    • 2mol/L NaCl(溶解DNA)

    • 95%酒精(析出DNA)

    • 二苯胺试剂(沸水浴鉴定)

    • 蒸馏水、滤纸、玻璃棒等

二、实验步骤

一、细胞核物质提取

  1. 破碎细胞

    • 取鸡血细胞液(5-10mL),加入蒸馏水(300mL),顺时针方向快速搅拌5分钟,使细胞吸水涨破,释放核物质。
  2. 过滤

    • 用纱布过滤,收集含DNA和蛋白质的滤液。

二、DNA溶解与杂质去除

  1. 溶解DNA

    • 向滤液中加入2mol/L NaCl溶液(40mL),顺时针方向搅拌4分钟,使DNA充分溶解。
  2. 初步除杂

    • 加入少量蛋白酶(如嫩肉粉)水解蛋白质(注意DNA对蛋白酶稳定)。

三、DNA析出与纯化

  1. 析出DNA

    • 缓缓加入冷却的95%酒精(体积与滤液相等),边加边搅拌,观察出现乳白色丝状物(DNA)时停止加酒精。
  2. 过滤与再溶解

    • 用多层纱布过滤,取含DNA的滤液,加入2mol/L NaCl溶液(50mL)缓慢搅拌3分钟,重新溶解DNA。

四、DNA鉴定

  1. 沸水浴反应

    • 将DNA溶液加热至沸水浴(5分钟),加入二苯胺试剂,冷却后观察溶液是否呈蓝色。蓝色表示DNA存在。

三、注意事项

  1. 材料选择 :优先选用鸡血等含DNA量高的材料,若使用植物细胞需添加洗涤剂和食盐。

  2. 操作规范

    • 蒸馏水需沿烧杯内壁缓慢加入,避免形成气泡;

    • 二苯胺需沸水浴加热,防止分解。

  3. 关键步骤

    • 溶解DNA时转速不宜过快,避免DNA沉淀;

    • 酶解蛋白质时需控制温度,避免DNA变性。

四、实验原理总结

  • 溶解与析出 :利用DNA在不同浓度NaCl中的溶解度差异(2mol/L溶解,0.14mol/L析出);

  • 纯化 :通过酒精沉淀去除部分蛋白质,二苯胺用于最终鉴定;

  • 特性对比 :DNA耐高温(80℃以上变性),而蛋白质在60-80℃失活。

通过以上步骤,可高效提取并鉴定DNA,为后续实验奠定基础。

提示:本内容不能代替面诊,如有不适请尽快就医。
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