以下是高中生物实验中DNA粗提取与鉴定的标准步骤及注意事项:
一、实验材料与试剂
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材料 :鸡血、哺乳动物红细胞等含DNA量高的生物组织
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试剂 :
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0.1g/mL柠檬酸钠(溶解细胞)
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2mol/L NaCl(溶解DNA)
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95%酒精(析出DNA)
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二苯胺试剂(沸水浴鉴定)
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蒸馏水、滤纸、玻璃棒等
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二、实验步骤
一、细胞核物质提取
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破碎细胞
- 取鸡血细胞液(5-10mL),加入蒸馏水(300mL),顺时针方向快速搅拌5分钟,使细胞吸水涨破,释放核物质。
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过滤
- 用纱布过滤,收集含DNA和蛋白质的滤液。
二、DNA溶解与杂质去除
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溶解DNA
- 向滤液中加入2mol/L NaCl溶液(40mL),顺时针方向搅拌4分钟,使DNA充分溶解。
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初步除杂
- 加入少量蛋白酶(如嫩肉粉)水解蛋白质(注意DNA对蛋白酶稳定)。
三、DNA析出与纯化
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析出DNA
- 缓缓加入冷却的95%酒精(体积与滤液相等),边加边搅拌,观察出现乳白色丝状物(DNA)时停止加酒精。
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过滤与再溶解
- 用多层纱布过滤,取含DNA的滤液,加入2mol/L NaCl溶液(50mL)缓慢搅拌3分钟,重新溶解DNA。
四、DNA鉴定
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沸水浴反应
- 将DNA溶液加热至沸水浴(5分钟),加入二苯胺试剂,冷却后观察溶液是否呈蓝色。蓝色表示DNA存在。
三、注意事项
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材料选择 :优先选用鸡血等含DNA量高的材料,若使用植物细胞需添加洗涤剂和食盐。
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操作规范 :
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蒸馏水需沿烧杯内壁缓慢加入,避免形成气泡;
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二苯胺需沸水浴加热,防止分解。
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关键步骤 :
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溶解DNA时转速不宜过快,避免DNA沉淀;
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酶解蛋白质时需控制温度,避免DNA变性。
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四、实验原理总结
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溶解与析出 :利用DNA在不同浓度NaCl中的溶解度差异(2mol/L溶解,0.14mol/L析出);
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纯化 :通过酒精沉淀去除部分蛋白质,二苯胺用于最终鉴定;
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特性对比 :DNA耐高温(80℃以上变性),而蛋白质在60-80℃失活。
通过以上步骤,可高效提取并鉴定DNA,为后续实验奠定基础。